Coelenterazine 400a 腔肠素400a
产品名称: Coelenterazine 400a 腔肠素400a
英文名称: Coelenterazine 400a 腔肠素400a
产品编号: 40905ES02
产品价格: 0
产品产地: Yeasen
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T13:09:52
使用范围: null
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Coelenterazine 400a 腔肠素400a
产品信息
背景描述
腔肠素(Coelenterazine)是自然界中资源最丰富的天然荧光素,是绝大多数海洋发光生物(超过75%)的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物,比如海肾荧光素酶(Rluc),Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc),以及包括水母发光蛋白(aequorin)和薮枝螅发光蛋白(Obelia)在内的光蛋白(Photoproteins)。其发光原理是:以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下,氧化腔肠素,产生高能量的中间产物,并在此过程中发射蓝色光,峰值发射波长约为450~480 nm。
腔肠素作为水母发光蛋白复合物(Aequorin)的组成成分,只有与钙离子(Ca2+)结合后,才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide,同时释放出CO2和蓝色荧光(~466 nm)。其具有以下几个优点:1)能检测较大范围的Ca2+浓度(0.1-100 μM);2)样品无自体荧光,背景荧光较低,尽管信号较荧光钙离子指示剂弱,但信噪比更高,因此具有较高灵敏度;3)Aequorin能够稳定维持在细胞内,能够进行数小时至数天Ca2+的监测。
腔肠素具有能量转移(Bioluminescence Resonance Energy Transfer,BRET)的特性:在底物腔肠素存在的情况下,荧光素酶(如Rluc)催化底物发生蓝光,能量转移到EYFP(增强的黄色荧光蛋白),发出绿光(~530 nm)。通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系研究蛋白-蛋白之间的相互作用。BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定,消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量。
主要应用
活体成像;报告基因检测;检测细胞/组织内活性氧(ROS)水平:细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚**阴离子能够增强腔肠素在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光;高通量筛选;监测活细胞内钙离子水平。
产品描述
腔肠素400a(Coelenterazine 400a)系天然腔肠素衍生物,是海肾荧光素酶(Rluc)的良好底物,但不能被Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc)氧化。它的最大发射波长在400 nm左右,对GFP受体蛋白的信号干扰最小,使得其成为BRET研究的重要腔肠素类底物。
产品性质
英文别名(English synonym)
DeepBlueCTM; Di-dehydro Coelenterazine
CAS号(CAS NO.)
70217-82-2
分子式(Formula)
C26H21N3O
分子量(Molecular weight)
391.48 g/mol
外观(Appearance)
黄色至橘色粉末
溶解性(Solubility)
溶于甲醇和乙醇,不溶于DMSO
纯度(Purity)(TLC)
>98%
结构(Structure)
运输和保存方法
冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存,最好保存在惰性气体环境下,避免接触空气。有效期1年。
腔肠素400a工作液的配制
腔肠素400a溶解特性:不溶于水。目前毒性最低的溶剂是100%乙醇,可配制浓度为0.1-1 mg/ml。加入pH低于7.0的酸性缓冲液(碱性pH会快速降解底物)稀释成低浓度工作液。切忌溶于DMSO。
腔肠素400a保存特性:建议溶液现配现用!体外实验,需将稀释后的工作液室温放置20-30 min,方可稳定工作。该工作液可室温稳定放置3-4 h,有非常微弱的信号衰减发生。不建议储存液-20℃或更低温度保存,因为其高能量的二氧环丁酮结构即使在低温的情况下也会发生降解,导致荧光强度明显变弱。短时间保存条件:-70℃避光保存于塑料管内(溶液中不含有Ca2+),且有惰性气体保护。
腔肠素工作液的配制:称取1 mg腔肠素400a粉末溶解于1 ml乙醇(或甲醇)中配置成浓度为1 mg/ml的母液。在使用时需将母液用合适的缓冲液(比如PBS)稀释成需要浓度的工作液。比如常用的工作液浓度是100 μM,可使用391.5ul 的1 mg/ml的母液用PBS稀释到10ml,得到一个100uM的溶液。
BRET 生物发光共振能量转移(可根据具体实验发生变动)
详细步骤可参考文献:Gersting SW, et al.